·化學(xué)組成與概述

AF594 NHS ester 是一種高性能、長斯托克斯位移的紅色熒光染料，其活性酯形式專門用于高效標記生物分子（如蛋白質(zhì)、抗體、肽段和寡核苷酸）中的伯氨基（-NH?）。

AF594熒光團：提供激發(fā)/發(fā)射峰值在~590/617nm的明亮橙紅色熒光，熒光量子產(chǎn)率高，光穩(wěn)定性強，抗光漂白能力優(yōu)于傳統(tǒng)羅丹明染料。

NHS酯基團：作為活化的化學(xué)基團，能夠與生物分子（如蛋白質(zhì)、肽、抗體和含有-NH2基團的分子）上的氨基基團反應(yīng)，生成穩(wěn)定的酰胺鍵，實現(xiàn)高度特異性的標記和追蹤。

·基本性能參數(shù)

CAS號：1638544-48-5

中文名稱：AF594 活性酯；AF594 NHS酯

英文名稱：AF594 NHS ester；AF 594 Succinimidyl Ester；Alexa Fluor 594 NHS Ester；Alexa Fluor 594 Succinimidyl Ester；AF 594 SE；Alexa Fluor 594 SE

外觀：深藍色晶體

純度：≥95%

供應(yīng)商：西安凱新生物

結(jié)構(gòu)式：

?儲存條件：-20℃以下冰凍、干燥保存，避免反復(fù)凍融

安全性：

操作時需佩戴防護裝備，避免接觸皮膚和眼睛。

如不慎接觸，請立即用大量清水沖洗，并尋求醫(yī)療幫助。

·實驗前儲備液制備

通用要求：未使用的原液需按單次用量分裝，于-20°C保存，并避免反復(fù)凍融。

1. 蛋白原液 (溶液A)

配制：100 µL 反應(yīng)緩沖液 (1M 碳酸鈉或磷酸鹽緩沖液，pH~9.0) + 900 µL 目標蛋白溶液 (>2 mg/mL)，混勻得 1 mL。

pH要求：終 pH 需為 8.5±0.5。若低于 8.0，用 1M 碳酸氫鈉或 pH 9.0 磷酸鹽緩沖液調(diào)至 8.0-9.0。

緩沖體系：蛋白應(yīng)溶于 pH 7.2-7.4 的 1X PBS。若溶于 Tris 或甘氨酸緩沖液，需用 1X PBS 透析以去除游離胺/銨鹽。

兼容性：缺損抗體、含 BSA/明膠、硫柳汞的抗體標記效果差，需通過透析或旋轉(zhuǎn)柱去除干擾物。

濃度要求：濃度 <2 mg/mL 會降低偶聯(lián)效率，推薦終濃度為 2-10 mg/mL。

2. 染料原液 (溶液B)

配制：用無水DMSO將 iFluor™594 SE 配制成 10 mM 溶液，混勻。

使用與儲存：建議標記前現(xiàn)配；長期儲存會降低活性。溶液B可在冰箱保存最多兩周，避免凍融。

樣本標記方案 (以山羊抗小鼠IgG為例)

偶聯(lián)反應(yīng)

投料比：按染料:蛋白 = 10:1 摩爾比。示例 (蛋白濃度10 mg/mL，分子量~200 kDa)：取 5 µL 溶液B 加入 95 µL 溶液A 中。

反應(yīng)條件：混勻后，室溫旋轉(zhuǎn)或搖晃反應(yīng) 30-60 分鐘。

AF594 染料特性

明亮、水溶性、pH 4-10 不敏感。適用于高染料/蛋白比的標記，高標記度(DOL)偶聯(lián)物無明顯熒光猝滅，可提高檢測限。

·相關(guān)試劑

AF 488 DBCO

AF 568 DBCO

AF 532 NHS ester

JOE azide, 5-isomer

Cyanine7 maleimide

sulfo-Cyanine3 DBCO

TAMRA DBCO, 5-isomer

sulfo-Cyanine3 tetrazine

sulfo-Cyanine7.5 azide

BDP R6G carboxylic acid

JOE NHS ester, 5-isomer

sulfo-Cyanine7.5 NHS ester

LumiTracker Mito Red CMXRos

dU (Deoxyuridine) phosphoramidite

以上內(nèi)容均由西安凱新生物科技有限公司YNN編輯整理

該試劑僅用于科研實驗，不可用于人體

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