人鈣聯(lián)蛋白(calnexin)ELISA試劑盒使用說明書

　　人鈣聯(lián)蛋白(calnexin)ELISA試劑盒使用說明書?的核心內(nèi)容基于雙抗體夾心法，用于定量檢測人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的鈣聯(lián)蛋白(Calnexin)含量。以下是標(biāo)準(zhǔn)化操作流程與關(guān)鍵要點(diǎn)：

　　一、試劑盒基本信息?

　　檢測原理?：雙抗體夾心法

　　采用純化的人鈣聯(lián)蛋白抗體包被微孔板，形成固相抗體，依次加入樣本、HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過TMB顯色反應(yīng)測定OD值。

　　檢測范圍?：具體以說明書為準(zhǔn)，靈敏度通常低于 ?1.0 ng/mL?。

　　樣本類型?：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清、細(xì)胞裂解液等生物液體。

　　保存條件?：試劑盒于 ?2–8℃? 保存，有效期 ?6個(gè)月?。

　　試劑盒組成?(以96孔為例)：

　　酶標(biāo)包被板 ×1

　　標(biāo)準(zhǔn)品 ×1瓶(0.5 mL)

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 ×1瓶(6 mL)

　　顯色劑A液、B液 ×各6 mL

　　終止液 ×6 mL

　　濃縮洗滌液 ×1瓶(30倍濃縮)

　　封板膜、說明書、自封袋等

　　二、操作步驟?

　　試劑準(zhǔn)備?

　　所有試劑從2–8℃取出后，室溫平衡 ?30分鐘?。

　　洗滌液：將30×濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋至1×工作液(如20 mL濃縮液 + 580 mL水)。

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　初始標(biāo)準(zhǔn)品濃度為2700 ng/L，按倍比稀釋法配制系列濃度(如2700、1350、675、337.5、168.75、84.38、42.19、0 ng/L)。

　　每孔加樣100 μL，空白孔不加標(biāo)準(zhǔn)品。

　　加樣與孵育?

　　每孔加入 ?100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本?。

　　37℃孵育1小時(shí)?，確保抗原抗體充分結(jié)合。

　　洗滌?

　　棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 ?350 μL洗滌液?，靜置30秒，重復(fù)5次。

　　洗后拍干，避免殘留影響背景值。

　　顯色反應(yīng)?

　　每孔加入 ?50 μL顯色劑A液 + 50 μL顯色劑B液?。

　　37℃避光孵育15分鐘?，TMB在HRP催化下由無色變?yōu)樗{(lán)色。

　　終止與讀數(shù)?

　　每孔加入 ?50 μL終止液?，顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。

　　立即在450 nm波長下讀取OD值?，建議在終止后10分鐘內(nèi)完成。

　　數(shù)據(jù)分析?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　使用線性回歸方程計(jì)算樣本濃度，再乘以稀釋倍數(shù)得到實(shí)際濃度。

　　三、注意事項(xiàng)?

　　避免使用含NaN?的樣本?，因其抑制HRP酶活性。

　　樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融?，以防蛋白降解。

　　加樣時(shí)更換槍頭?，防止交叉污染。

　　底物B液對光敏感?，需避光保存和操作。

　　不同批號(hào)試劑不可混用?，以免影響準(zhǔn)確性。

　　注：本公司產(chǎn)品供科研實(shí)驗(yàn)，以上供參考!

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