經(jīng)皮水分流失（Transepidermal Water Loss, 簡稱TEWL）是體外透皮試驗(yàn)（IVPT）皮膚屏障完整性評價(jià)（Skin Barrier Integrity Test）和化妝品功效評價(jià)中，衡量皮膚屏障功能的關(guān)鍵指標(biāo)。今天，我們就來深度拆解：經(jīng)皮水分流失測量儀為什么要校準(zhǔn)？到底能不能在實(shí)驗(yàn)室自己校準(zhǔn)？以及具體的校準(zhǔn)流程是什么？建議先收藏，再閱讀！

一、為什么經(jīng)皮水分流失測量儀必須定期校準(zhǔn)？

1. 傳感器自然漂移

經(jīng)皮水分流失TEWL測量的物理本質(zhì)，是量化皮膚表面微弱的水汽蒸發(fā)通量。這意味著探頭內(nèi)部的溫濕度傳感器對測試環(huán)境的微氣流、溫度和濕度變化必須非常敏感。隨著設(shè)備使用時(shí)長的增加，傳感器不可避免地會發(fā)生老化或附著微塵，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)漂移（Data Drift）。未經(jīng)校準(zhǔn)的儀器，數(shù)值偏高或偏低、波動大，其測量結(jié)果無法反映皮膚樣本真實(shí)的屏障狀態(tài)。反復(fù)重測驗(yàn)證，大量耗費(fèi)樣本、試劑、人力，不可避免的延長項(xiàng)目研發(fā)周期。

2. 確保離體皮膚屏障完整性數(shù)據(jù)的有效性與合規(guī)性

根據(jù)美國FDA在2022年10月發(fā)布的《In Vitro Permeation Test Studies for Topical Drug Products Submitted in ANDAs Guidance for Industry》行業(yè)指南草案指出：經(jīng)皮水分流失測量儀需進(jìn)行合理校準(zhǔn)（由制造商完成，部分設(shè)備還需在每組試驗(yàn)開始前再次校準(zhǔn)）。申報(bào)方可提供所用特定經(jīng)皮水分流失測量儀對應(yīng)的制造商規(guī)定相關(guān)校準(zhǔn)流程資料，該資料可與體外透皮試驗(yàn)方法開發(fā)報(bào)告一同隨同仿制藥申請?zhí)峤?，用以佐證實(shí)驗(yàn)室制定的經(jīng)皮水分流失測量相關(guān)技術(shù)流程具備合理性。

藥品研發(fā)本質(zhì)就是數(shù)據(jù)驅(qū)動研發(fā)，數(shù)據(jù)真實(shí)、準(zhǔn)確，是藥品上市銷售、安全落地的根本保障。缺乏標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)程序的低端經(jīng)皮水分流失測量儀，其輸出的測試數(shù)據(jù)不具備溯源性和可重復(fù)性。定期校準(zhǔn)是確保跨批次、跨周期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)具有可比性（Comparability）和重現(xiàn)性（Reproducibility）的重要途徑，也是應(yīng)對行業(yè)監(jiān)管抽查、發(fā)表高水平學(xué)術(shù)論文（SCI）的基礎(chǔ)保障。

二、TEWL校準(zhǔn)真的很難操作嗎？

很多人認(rèn)為這種冷門儀器只能返廠到國外校準(zhǔn)，甚至認(rèn)為經(jīng)皮水分流失測量儀目前沒有校準(zhǔn)方法。事實(shí)并非如此，TEWL校準(zhǔn)在當(dāng)下是可行且高效的。

成熟的校準(zhǔn)規(guī)范：目前國際上針對微環(huán)境溫濕度傳感器已有成熟的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范（如NPL）。

多元的校準(zhǔn)途徑：

原廠校準(zhǔn)：大多數(shù)主流經(jīng)皮水分流失測量儀品牌（如ASCH，Courage+Khazaka等）在國內(nèi)均設(shè)有售后服務(wù)中心，提供標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)服務(wù)。

日常定期校準(zhǔn)套件：部分經(jīng)皮失水儀(如Biox Aquaflux)配備了基于“超微量純水液滴法”方法的校準(zhǔn)工具，實(shí)驗(yàn)室人員可通過標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行日常校準(zhǔn)。

采用1 μl超微量純水測得的水汽蒸發(fā)量時(shí)間序列校準(zhǔn)曲線，將曲線下方面積與純水蒸發(fā)量建立等量對應(yīng)關(guān)系。從校準(zhǔn)曲線中可以看出兩種不同原理（封閉腔冷凝室和開放腔）經(jīng)皮水分流失測量儀測得的曲線面積相近，因此二者的校準(zhǔn)結(jié)果也十分接近。開放腔室信號出現(xiàn)波動，是由實(shí)驗(yàn)室空調(diào)周期性啟停運(yùn)作所導(dǎo)致。

三、經(jīng)皮水分流失測量儀標(biāo)準(zhǔn)化校準(zhǔn)操作指南

先進(jìn)的經(jīng)皮水分流失測量儀通常有科學(xué)且具有操作性的日常校準(zhǔn)規(guī)程。以Biox Aquaflux臺式經(jīng)皮水分流失測量儀為例，標(biāo)準(zhǔn)的定期實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)（Calibration）通常包含以下三個(gè)步驟：

步驟一：環(huán)境靜置與熱平衡（Environmental Equilibration）

1. 將TEWL經(jīng)皮水分流失測量儀放置于符合標(biāo)準(zhǔn)的恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室中（推薦溫度20-22℃，相對濕度40-60%）。

2. 開機(jī)預(yù)熱30分鐘左右，確保探頭內(nèi)的傳感器充分適應(yīng)環(huán)境，達(dá)到穩(wěn)定的熱平衡狀態(tài)。

步驟二：標(biāo)準(zhǔn)源標(biāo)定（Standard Source Calibration）

1. 零點(diǎn)校準(zhǔn)（Zero Calibration）：使用Aquaflux配備的“零點(diǎn)校準(zhǔn)帽”，確保儀器在無水汽蒸發(fā)狀態(tài)下的讀數(shù)精準(zhǔn)歸零。

2. 高點(diǎn)校準(zhǔn)（High-point Calibration）： 用校準(zhǔn)套件中配備的超微量注射器取0.5μl實(shí)驗(yàn)室超純水，將其注入專用校準(zhǔn)帽中，模擬皮膚水分流失，將校準(zhǔn)帽擰緊，點(diǎn)擊開始校準(zhǔn)。

步驟三：校準(zhǔn)系數(shù)確認(rèn)（Factor Adjust）

校準(zhǔn)帽中的微量水開始揮發(fā)直到水分流失完畢，軟件算法將軟件自動計(jì)算出新的校準(zhǔn)系數(shù)(Calibration Factor)，如下圖所示新的校準(zhǔn)系數(shù)為0.6764。

熟練掌握該SOP，整個(gè)校準(zhǔn)流程僅需30-60分鐘，即可有效避免經(jīng)皮水分流失測量儀長時(shí)間使用過程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)漂移，滿足IVPT試驗(yàn)的合規(guī)性要求。

四、結(jié)語

經(jīng)皮水分流失測量儀的校準(zhǔn)絕非可有可無的走過場，而是構(gòu)筑IVPT體外透皮試驗(yàn)合規(guī)性，嚴(yán)謹(jǐn)性的重要環(huán)節(jié)。及時(shí)且正確地對經(jīng)皮水分流失測量儀開展校準(zhǔn)工作，是符合國內(nèi)外經(jīng)皮給藥研究指南、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系及保障測量結(jié)果可信的關(guān)鍵舉措。實(shí)驗(yàn)室管理者在采購經(jīng)皮失水儀時(shí)，應(yīng)將“是否具備標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)套件與方法”作為URS關(guān)鍵考量要求。定期校準(zhǔn)經(jīng)皮水分流失測量儀，是對每一個(gè)皮膚樣本屏障完整性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠性的基本保證。

(大家實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)皮水分流失測量儀多久校準(zhǔn)一次呢？在皮膚屏障測試中遇到過哪些“數(shù)據(jù)玄學(xué)”？歡迎在評論區(qū)留言討論！或聯(lián)系我們關(guān)于經(jīng)皮水分流失測量儀校準(zhǔn)服務(wù)詳情。)