elisa實(shí)驗(yàn)：樣本采集和保存問(wèn)題

　　一、不同類型樣本的采集要點(diǎn)

　　血清樣本?：靜脈采血后室溫靜置1小時(shí)，4℃下2500rpm離心10分鐘取上清，全程避免溶血，紅細(xì)胞釋放的過(guò)氧化物酶會(huì)造成非特異性顯色，干擾HRP標(biāo)記的ELISA結(jié)果。

　　血漿樣本?：采血后30分鐘內(nèi)冰上分離血漿，優(yōu)先選用EDTA作為抗凝劑，避免肝素抗凝，抗凝不全會(huì)因纖維蛋白原干擾產(chǎn)生假陽(yáng)性。

　　尿液/腦脊液等樣本?：用無(wú)菌容器收集，4℃下2500rpm離心10分鐘去除沉淀，樣本需避免經(jīng)血、陰道分泌物污染。

　　細(xì)胞上清/組織樣本?：細(xì)胞上清直接收集后離心去除細(xì)胞碎片;組織樣本需液氮速凍，后續(xù)勻漿后離心取上清檢測(cè)。

　　二、樣本的規(guī)范保存條件

　　24-48小時(shí)內(nèi)檢測(cè)：可置于2-8℃環(huán)境暫存，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致蛋白聚合加深本底。

　　1周內(nèi)檢測(cè)：分裝后凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融會(huì)造成蛋白降解，細(xì)胞上清類樣本凍融1-2次后就可能無(wú)法用于檢測(cè)。

　　長(zhǎng)期保存：分裝后置于-70℃環(huán)境，可穩(wěn)定保存6個(gè)月以上，分裝時(shí)按單次檢測(cè)量分份，避免多次開(kāi)蓋污染樣本。

　　三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　樣本采集后需盡快處理，避免細(xì)菌污染，菌體自帶的內(nèi)源性HRP會(huì)引發(fā)假陽(yáng)性結(jié)果。

　　冷凍樣本復(fù)溶后需輕柔混勻，若出現(xiàn)沉淀需再次離心澄清后再檢測(cè)，避免雜質(zhì)干擾反應(yīng)體系。

　　提前預(yù)估樣本用量，準(zhǔn)備2-3倍于單次檢測(cè)的體積，預(yù)留重復(fù)樣的余量，避免樣本量不足導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中斷。

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