試劑名稱：Firefly Luciferase，Recombinant重組螢火蟲熒光素酶
儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。
產(chǎn)地：西安強化生物
CAS：61970-00-1
分子量：~60kDa
狀態(tài)：液體
一、描述與基本特性：
重組螢火蟲熒光素酶是一種通過基因工程手段表達(dá)的酶，源自北美螢火蟲（Photinus pyralis）的熒光素酶基因（luc），通常在大腸桿菌（E. coli）系統(tǒng)中重組表達(dá)。
重組表達(dá)的優(yōu)勢
穩(wěn)定性與一致性：相比天然提取的酶，重組技術(shù)消除了季節(jié)性和地域性差異，確保批次間的高度一致性。
高純度與活性：典型活性≥1×1011 units/mg蛋白，可凍干保存（凍干粉）或以緩沖液形式（液體）提供。
工程化改良：部分版本通過基因修飾增強熱穩(wěn)定性，適用于需長期保存或高溫反應(yīng)的實驗。
【催化機制與生物學(xué)功能】
兩步催化反應(yīng)（依賴ATP、Mg2?、O?）：
(1) 熒光素 + ATP → 熒光素酶 → 熒光素腺苷酸 + PPi
(2) 熒光素腺苷酸 + O? → 氧熒光素 + AMP + 光子（λmax=560 nm）
關(guān)鍵輔因子：Mg2?穩(wěn)定ATP結(jié)合，鈣離子可加速反應(yīng)。
生物學(xué)功能
報告基因系統(tǒng)：檢測啟動子活性、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、miRNA靶向作用。
ATP定量：靈敏度達(dá)1 fmol ATP（0.2 μg酶）。
活體成像：非侵入性監(jiān)測基因表達(dá)。
二、生產(chǎn)與純化技術(shù)
（一）重組表達(dá)系統(tǒng)
表達(dá)宿主：大腸桿菌。
載體：pET系列，含組an酸標(biāo)簽便于純化。
基因來源：北美螢火蟲，與日本螢火蟲基因同源性60-80%。
（二）純化工藝
L344A突變提升熱穩(wěn)定性。
定向進化篩選耐熱突變體。
親和層析：鎳柱固定金屬離子親和層析。
收率：約2 mg/L培養(yǎng)液，純度≥98%。
突變體優(yōu)化：
L344A突變提升熱穩(wěn)定性。
定向進化篩選耐熱突變體。
（三）制劑形式
液體：1 mg/mL于Tris-甘油緩沖液，-20℃保存。
凍干粉：含BSA和蔗糖保護劑，復(fù)溶于高鹽緩沖液。
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